Na~+/K~+-ATP酶α1亚单位小干扰RNA和哇巴因诱导肝癌HepG2细胞S期阻滞及其机制

• 作者: 呼文亮 徐忠伟 徐瑞成 王凤梅 陈小义
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,肝细胞 哇巴因 Na~+/K~+-ATP酶 细胞周期 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 所属期刊栏目: 肝癌基础与临床
• 页码范围: 813-817
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2010.12.007

摘要

目的 观察哇巴因联合Na~+/K~+-ATP酶(钠泵)α1亚单位小干扰RNA(siRNA)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响.方法 分析人肝癌临床组织标本、正常肝组织和肝癌细胞系SMC7721、Bel7402和HepG2细胞钠泵α1亚单位的表达.CCK-8法检测采用钠泵α1亚单位siRNA和哇巴因作用肝癌HepG2细胞增殖抑制状况,分析各组细胞的钠泵活性变化,流式细胞术分析细胞周期变化.实时定量PCR和蛋白质印迹法检测钠泵α1、促分裂源活化蛋白激酶1(MAPK1)、细胞围期蛋白1(CyclinA)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白抑制因子(P21~(WSF1))表达的变化.结果 肝癌组织标本的钠泵α1亚单位密度值(174.7±16.8)明显高于正常肝组织(65.3±7.9,P<0.05);HepG2细胞钠泵α1亚单位表达明显高SMMC-7721和Bel-7402细胞(P<0.05).siRNA、哇巴因和联合用药可抑制HepG2细胞的增殖,联合实验组效果更显著(P<0.05),0.03μmol/L siRNA组、0.1 μmol/L哇巴因和联合实验组细胞24、48和72 h抑制率分别为17.4%、20.3%、24.3%,37.5%、44.3%、51.2%,52.3%、70.2%、88.2%.各实验组均出现钠泵活性降低,以联合实验组最显著(P<0.05).0.1 μmol/哇巴因和联合实验组HepG2细胞S期比例从24.2%上升至66.5%和75.2%;实时定量PCR和蛋白质印迹检测显示哇巴因组和联合实验组P21<'WAF1>表达上调而钠泵μ1亚单位、MAPK1、CyclinA、CDK2和PCNA表达下调.结论 钠泵α1亚单位siRNA联合哇巴因抑制HepG2细胞钠泵后可抑制细胞增殖,而P21~(WAF1)表达上调和CyclinA/CDK2/PCNA周期调控复合体生成减少可能是引起S期阻滞的主要原因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	呼文亮	武警医学院生物教研室天津市职业和环境危害生物标志物重点实验室	52	374	9.0	17.0
2	王凤梅		26	138	7.0	10.0
3	陈小义	武警医学院生物教研室天津市职业和环境危害生物标志物重点实验室	41	254	9.0	14.0
4	徐瑞成	武警医学院生物教研室天津市职业和环境危害生物标志物重点实验室	27	176	7.0	12.0
5	徐忠伟	武警医学院生物教研室天津市职业和环境危害生物标志物重点实验室	6	22	3.0	4.0