牛瑟氏泰勒虫P23主要表面蛋白基因的克隆及原核表达

• 作者: 李文学 李海峰 金清洙
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛瑟氏泰勒虫 重组P23表面蛋白 大肠杆菌 表达条件
• 年，卷（期）: 2010,（16）
• 页码范围: 8462-8465,8483
• 分类号: S858.23
• 字数: 4735字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.16.068

摘要

[目的]研究牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆及原核表达.[方法]采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫中国延边株P23基因片段,将扩增产物克隆入pMD18-T载体构建重组质粒pMD18-P23,经PCR、双酶切鉴定后测序;将目的基因片段亚克隆入表达载体pGEX-4T-1构建重组表达质粒pGEX-4T-P23,转化宿主菌BL21获得重组菌.通过对诱导条件的优化,根据SDS-PAGE确定表达蛋白的最佳表达条件;Western-blotting检测表达蛋白的反应原性.[结果]所克隆的牛瑟氏泰勒虫P23基因片段长507 bp,与牛瑟氏泰勒虫日本株P23基因的核苷酸同源性达99.4%,表达的融合蛋白大小约为46 ku;诱导时机以接种培养后2 h为最佳,诱导时间以6 h为最佳,诱导温度以34 ℃为最佳,0.008～1 000 mmol/L的IPTG对表达量的影响不大.Western blotting检测表明该蛋白具有较好的抗原性.[结论]为牛瑟氏泰勒虫病的免疫学诊断和预防等研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文学	延边大学农学院	22	20	2.0	3.0
2	李海峰	延边大学农学院	26	65	4.0	7.0