构建稳定表达RFP及嘌呤霉素抗性的K562细胞株

• 作者: 喻琴 张赟 李廷玉 杨军 毕杨 陈洁
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 红色荧光蛋白 慢病毒重组质粒 嘌呤霉素 人白血病K562细胞
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 304-308
• 分类号: R34
• 字数: 3826字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2011.04.005

摘要

目的 构建稳定表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和嘌呤霉素(puromycin)抗性的K562-PM-RFP细胞株,便于慢性粒细胞性白血病研究中K562细胞的观察和筛选.方法 采用PCR法获得RFP片段,将其插入到慢病毒pGC-FU-3FLAG-IRES-Puromycin 载体中获得pGC-PM-RFP重组质粒,经脂质体转染到293T 细胞中获得慢病毒LV-PM-RFP,有限稀释法检测慢病毒在293T细胞中的转染效率,用包装获得的慢病毒感染K562细胞,经嘌呤霉素筛选获得RFP阳性的K562-PM-RFP细胞株.结果 PCR及测序结果证实目的 基因RFP正确克隆至慢病毒质粒中,经慢病毒LV-PM-RFP感染的K562细胞能在嘌呤霉素抗性培养基中存活,并稳定表达RFP.结论 成功构建了慢病毒重组质粒pGC-PM-RFP,并获得了携带RFP及嘌呤霉素抗性基因的K562-PM-RFP细胞株.