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摘要:
目的 制备针对黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的siRNA慢病毒载体,转染入原代培养的大鼠海马神经元细胞,筛选最佳的感染条件和沉默靶点序列.方法 根据siRNA原理设计、构建、酶切、转化、PCR鉴定、阳性克隆测序并病毒包装3种靶向大鼠FAK的siRNA(T1,T2,T3),并转染至原代培养的大鼠海马神经元细胞,荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量PCR检测神经元细胞FAK 基因表达,Western blot检测FAK蛋白表达.结果 成功制备3种FAK siRNA慢病毒载体,并成功转染到神经元细胞中,在感染复数(MOI)为10并加入5 μg/mL polybrene条件下转染率达到90%以上.T1、T2、T3均可抑制FAK 基因及蛋白的表达,但T1沉默效果最好,敲除效率达到65%,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 筛选出最佳的转染条件及最佳沉默靶向性序列T1,为后续研究整合素在阿尔茨海默病发病中的机制奠定了实验基础.
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文献信息
篇名 慢病毒载体靶向沉默原代大鼠海马神经元黏着斑激酶表达siRNA的筛选
来源期刊 华中科技大学学报(医学版) 学科 生物学
关键词 小干扰RNA 黏着斑激酶 海马神经元
年,卷(期) 2011,(1) 所属期刊栏目
研究方向 页码范围 1-4,8
页数 分类号 Q781
字数 3313字 语种 中文
DOI 10.3870/j.issn.1672-0741.2011.01.001
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小干扰RNA
黏着斑激酶
海马神经元
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期刊影响力
华中科技大学学报(医学版)
双月刊
1672-0741
42-1678/R
大16开
武汉市航空路13号同济医学院学报
38-37
1957
chi
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