利用生物信息学数据及工具合成表达链霉亲和素基因

• 作者: 余睿 孟照辉 班韶 谢月辉 赵冲
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 生物信息学 基冈合成 链霉亲和素 链霉亲和素磁珠
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 171-175
• 分类号: R318
• 字数: 4122字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2011.02.012

摘要

目的:人工合成表达链霉亲和素基因,制备链霉亲和素磁珠复合物用于核酸分离.方法:利用NCBI、BCM等提供的生物信息及软件工具,将链霉亲和素蛋白的基因进行密码子优化,并分割成互为重叠的小片段寡聚核苷酸链,采用化学和酶促合成相结合的方法合成编码链霉亲和素蛋白基因.将纯化的链霉亲和素通过偶联剂与带羧基的磁粒共价结合,用于快速纯化生物素化的DNA.结果:用化学与酶促相结合一步法合成链霉亲和素全基因序列,用较短寡聚核苷酸链及较低的引物浓度合成该基因突变率很低,链霉亲和素在大肠杆菌中得到高效表达.用硅酸包衣的磁性微球对磁场反应良好且无磁记忆性,用碳二亚胺可实现活性羧基磁性微球与链霉亲和素两者的交联,反应条件温和.结论:制备的链霉亲和素磁珠复合物可用于生物素化的PCR产物纯化.