水凝胶包埋酶(单凝胶和双网络凝胶)及磁性粒子固定化酶的制备及评价

• 作者: 加藤 大 李翠苓 秋本 真友子 豊岡 利正 闵俊哲
• 来源期刊: 中国药学（英文版）
• 学科: 医学
• 关键词: 固定化酶 包埋酶 单凝胶 双网络凝胶 磁性粒子 胰蛋白酶 葡糖苷酸酶 CYP1A1
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 226-234
• 页数: 9页
• 分类号: R915.12
• 语种: 英文
• DOI: 10.5246/jcps.2011.03.028

摘要

酶固定化过程中,固定化酶的方法及其载体的选择是酶固定化过程的关键因素,适宜的固定化法和良好的载体微环境对酶活保持率提高和稳定性增强尤其重要.在本研究中,利用96孔微分析板评价了用于高通量筛选的水凝胶包埋酶(单凝胶和双网络凝胶)及磁性粒子固定化酶的制备方法及其对酶活性(保存时间,精度和重现性)的影响.胰蛋白酶(trypsin)成功地包埋在单凝胶和双网络凝胶中并且固定在磁性粒子上,然而,包埋在单凝胶和双网络凝胶,或固定在磁性粒子上的胃蛋白酶无法与底物反应.在对酶的适应性方面,与双网络凝胶比较,单凝胶和磁性粒子固定化法更加优越,适用于多种酶(如:胰蛋白酶,葡糖苷酸酶,CYP1A1)的固定.然而,我们也发现浸置后,以单凝胶包埋的固定酶有较多的损失.双网络凝胶包埋法只限于包埋胰蛋白酶,无法用于包埋其它酶,例如葡糖苷酸酶、CYP1A1和胃蛋白酶,因为双网络凝胶包埋法会由于丙烯酰胺和过硫酸胺的存在而使酶失去活性.在三种酶固定方法中,磁性粒子固定酶的方法能够最好地保留酶活性.另外,磁性粒子固定酶的稳定性比其他两种方法好,存放一周后胰蛋白酶和葡糖苷酸酶的活性没有任何下降.其次,磁性粒子固定法的重复利用重现性也良好.此外,尽管双网络凝胶法包埋酶的种类有限,但是我们认为通过改变丙烯酰胺等载体的选择和设计,改进载体微环境,可以使包埋酶的效率得到提高.