应用改良TAIL-PCR克隆黄瓜6PGDH基因上游序列

• 作者: 王全智 陈劲枫 陈啸寅 魏跃
• 来源期刊: 浙江农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 热不对称交错PCR 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 黄瓜 上游序列
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 园艺科学
• 页码范围: 900-904
• 分类号: S642.2
• 字数: 3685字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1524.2011.05.008

摘要

运用改良的热不对称交错PCR( thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)对黄瓜6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase gene,6PGDH)的上游序列进行了克隆.与最初的TAIL-PCR相比较,主要改进之处有:(1)根据Primer 5.0软件计算结果从随机RAPD引物库中筛选出合适的上游引物,低严谨和高严谨反应中的退火温度也分别进行了调整；(2)将热不对称交替反应继续应用到第3轮PCR扩增反应中以提高特异目的条带和减少非目的条带.经过3轮PCR扩增反应最终获得位于黄瓜6PGDH起始密码子ATG上游长度为517 bp新序列.试验结果表明,应用改良TAIL-PCR能快速、有效地克隆与已知区域相邻的序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈劲枫		92	1115	18.0	28.0
2	王全智		18	27	4.0	4.0
3	魏跃		11	61	5.0	7.0
7	陈啸寅		9	26	3.0	5.0