TAIL-PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析

• 作者: 李琳玲 王燕 程水源 程述汉 许锋
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 银杏 热不对称交错PCR 查尔酮合成酶基因 克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 237-243
• 页数: 7页
• 分类号: S664.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9980.2007.02.024

摘要

热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列.对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环.(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物.以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板,利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列Gbchs 1,以此序列设计3条特异引物,利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2.结果表明,Gbchs2长1 238 bp,编码304个氨基酸并包含3'末端序列.GbCHS2蛋白质序列与其他植物的CHS蛋白质序列高度同源,包含CHS蛋白质保守的环化作用活性位点,催化活性位点、香豆素活性位点、及催化活性基序.改良后的TAII-PCR方法为基因全长的克隆提供了一种简单快速高效的新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程水源	长江大学园艺园林学院	81	506	13.0	18.0
5	王燕	长江大学园艺园林学院	52	592	16.0	21.0
6	许锋	长江大学园艺园林学院	65	587	14.0	20.0
8	程述汉	山东农业大学园艺科学与工程学院	28	351	11.0	18.0
9	李琳玲	长江大学园艺园林学院	4	75	4.0	4.0