表达ESAT-6-gpi和IL-21的B16F10瘤苗的构建及其活性鉴定

• 作者: 何向锋 余方流 张洪义 曹文虎 王净 窦骏 赵枫姝
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: B16F10 IL-21 ESAT-6 GPI 肿瘤疫苗
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 358-362
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 语种: 中文

摘要

为构建膜表达糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定的结核杆菌早期分泌靶抗原6 kD(ESAT-6 )和分泌IL-21的B16F10瘤苗并鉴定其活性,利用重叠PCR法构建pIRES-ESAT-6-gpi/IL-21重组质粒,以脂质体转染重组质粒到B16F10细胞,G418筛选出阳性克隆,用RT-PCR、免疫荧光、FCM和Western blot检测瘤苗细胞靶抗原表达,用瘤苗细胞培养上清刺激小鼠CD8+ T细胞,检测瘤苗所分泌IL-21的生物学活性.结果表明,pIRES-ESAT-6-gpi/IL-21重组质粒DNA测序正确,B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗细胞目的基因ESAT-6表达于瘤苗细胞表面,增殖能力未受外源基因导入影响,分泌的IL-21具有生物学活性,为研究膜表达ESAT-6和分泌表达IL-21瘤苗的抗瘤效应奠定了基础.