抗人AFP单链抗体的制备、鉴定及其免疫学活性的测定

• 作者: 刘斌 张业伟 牛坚
• 来源期刊: 肝胆胰外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲胎蛋白 单链抗体 免疫学活性
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 325-328,335
• 分类号: R392-33
• 字数: 3756字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-1954.2011.04.024

摘要

目的 构建具有免疫学活性的抗人甲胎蛋白单链抗体ScFv (single chain fragment of variety region,ScFv),为进一步的研究奠定实验基础.方法 采用RT-PCR 技术,从分泌抗人AFP 单克隆抗体的杂交瘤细胞中扩增mAb 的VH、VL 基因,并进一步将其组装成VH-Linker-VL 型的ScFv 片段.将ScFv 片段亚克隆至原核分泌型表达载体pUC19,将pUC19-ScFv 纯化质粒转染大肠杆菌BL21 并用IPTG 诱导表达ScFv 蛋白.用SDS-PAGE方法检测ScFv 的表达,采用ELISA 检测ScFv 的亲和活性.结果 大肠杆菌BL21 可被诱导表达ScFv 蛋白.SDS-PAGE 法证实ScFv 蛋白在细胞包涵体有表达,大小约24 kD.ELISA 检测表明,ScFv 蛋白经能与重组人AFP 纯化抗原结合,并具有抑制亲本单抗与其结合的能力.结论 成功构建抗人AFP 的ScFv 表达载体,并能有效表达出具有免疫学活性的ScFv 蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘斌	徐州医学院附属医院普外科	85	312	8.0	12.0
2	张业伟	南京医科大学第一附属医院普外科	36	148	7.0	9.0
3	牛坚	徐州医学院附属医院普外科	48	241	8.0	12.0