产黄青霉苯乙酰CoA连接酶基因phl的克隆表达及其纯化酶的性质分析

• 作者: 冯惠勇 崔超 张春晓 杨金晓 王丽丽 陈小波
• 来源期刊: 河北工业科技
• 学科: 生物学
• 关键词: 苯乙酰CoA连接酶基因(phl) 基因克隆 表达 纯化 产黄青霉 RT-PCR
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 94-99
• 分类号: Q786
• 字数: 3828字
• 语种: 中文

摘要

笨乙酸与CoA反应,生成苯乙酰CoA,利用RT-PCR方法成功地从产黄青霉中扩增得到1737 bp不舍内含子的phl基因,并将其克隆到pET30a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中低温诱导表达.经SDS-PAGE检测分析,获得与预期大小(62.1kDa) -致的蛋白表达特异条带.通过Ni-NTA亲和层析柱纯化了重组酶,经检测苯乙酸的吸收,表明纯化酶对苯乙酸和CoA有明显的催化活性,酶活为1 680 U/mL.研究表明,纯化酶PCL最适宜温度为30℃,有一定的热稳定性,最适宜pH值为8.0,pH值为7.0～8.5时酶比较稳定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨金晓		7	11	2.0	2.0
2	王丽丽	河北科技大学生物科学与工程学院	108	517	11.0	20.0
3	冯惠勇	河北科技大学生物科学与工程学院	26	260	10.0	15.0
4	张春晓	河北科技大学生物科学与工程学院	24	67	4.0	7.0
5	崔超	河北科技大学生物科学与工程学院	1	2	1.0	1.0
6	陈小波	河北科技大学生物科学与工程学院	1	2	1.0	1.0