Tex13基因非放射性原位杂交探针的制备

• 作者: FRIEL P GRISWOLD MD MITCHELL D SMALL C 周庆 李莹 聂蓉 邱曙东 霍涌玮
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: Tex13 生殖细胞 减数分裂 RNA探针 原位杂交
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 131-134
• 分类号: Q492
• 语种: 中文

摘要

目的 研究制备地高辛(DIG)标记的Tex13(testis expressed gene 13)基因非放射性原位杂交探针,用于检测小鼠性腺Tex13基因的表达.方法 采用RT-PCR方法扩增Tex13靶序列,将其插入带SP6和T7 RNA聚合酶启动子的pGEM-T Easy质粒,转入大肠杆菌DH10B,经蓝白斑筛选获得重组质粒,用T7和SP6引物对重组质粒进行PCR扩增,以此PCR产物为模板,以DIG RNA Labeling Mix为底物,经SP6 RNA聚合酶和T7 RNA聚合酶体外转录,分别制备DIG标记的反义链和正义链RNA探针.结果 应用正常小鼠睾丸组织非放射性原位杂交实验,证实制备的探针具有较高的特异性和敏感性.结论 DIG标记Tex13基因杂交探针的成功制备,为进一步研究Tex13基因在小鼠性腺中的表达定位和发育规律以及它在减数分裂过程中的作用提供了实验基础.