杜氏盐藻叶绿体ATP合酶α亚单位基因启动子的克隆及初步功能分析

• 作者: 冯书营 李杰 潘卫东 薛乐勋 谷辉辉
• 来源期刊: 海洋科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 杜氏盐藻(Dunaliella salina) 叶绿体转化 ATP合酶α亚单位基因启动子
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: Q244|Q782
• 语种: 中文

摘要

采用DraⅠ，EcoRⅤ，PvuⅡ，ScaⅠ，SmaⅠ和StuⅠ六种内切酶消化杜氏盐藻（Dunaliella salina）叶绿体基因组DNA，与相应DNA接头连接，构建成无载体连接的盐藻叶绿体Genome Walker DNA文库。利用长距离PCR（long distance-polymerase chain reaction，LD-PCR）技术从该文库中克隆得到ATP合酶α亚单位（atpA）基因上游序列1347bp。启动子特征分析显示该序列具有一般启动子的保守序列特征，根据这些特征设计引物，扩增4个5’端系列缺失的启动子片段，并用绿色荧光蛋白基因作为报告基因，构建启动子5’端系列缺失重组质粒，以期鉴定不同启动子片段的驱动报告基因转录的活性。基因枪转化结果显示，启动子长度约1000bp的重组载体转化盐藻后，其转化株中有黄绿色的盐藻细胞出现。说明克隆的序列具有启动子活性，能驱动绿色荧光蛋白基因在杜氏盐藻中有效表达，为建立盐藻叶绿体转化系统奠定了工作基础。