Haxl基因及其特异性小干扰RNA对人胚肾293细胞凋亡的影响

• 作者: 刘力 龙琳
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: Haxl基因 小干扰RNA 293细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 602-608
• 分类号: R113
• 字数: 2988字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建Haxl基因特异性小干扰RNA(sihax),检测sihax对Haxl基因的表达抑制,在293细胞中研究Haxl和Haxl siRNAs对细胞凋亡的影响.方法 设计Haxl siRNA序列构建真核表达载体并转染到293细胞,倒置荧光显微镜下观察、流式细胞仪、AnnexinV-EGFP/PI双染法及RT-PCR检测靶基因Haxl的表达,以及293细胞的凋亡.结果 成功构建了Haxl siRNA干扰质粒pBS/U6-sihaxA和pBS/U6-sihaxB,并且sihaxB对Haxl抑制效应明显强于sihaxA.过量表达Haxl可显著抑制293细胞的早期凋亡比例.用sihaxA和sihaxB抑制内源性Haxl表达,可使晚期细胞凋亡比例从对照的9.03%±0.473%分别增加到10.8%±0.513%(P<0.05)和16.6%±0.858%(P<0.01).与此同时,sihaxB还可使早期细胞凋亡比例由37.3%±0.5%降低到32%±1.77%(P<0.01).结论 HaM siRNA对靶基因Haxl的抑制作用与靶序列的保守性有一定相关性.Haxl基因在细胞中参与凋亡相关的多种调节过程.本研究为进一步探讨Haxl功能奠定了基础.