秋茄KcRD22基因的克隆与功能分析

• 作者: 丁明全 侯佩臣 周晓阳 李妮亚 沈昕 王美娟 邓澍荣 陈少良 黄旭新
• 来源期刊: 基因组学与应用生物学
• 学科: 生物学
• 关键词: 秋茄 KeRD22 转基因烟草 抗盐性
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 273-280
• 分类号: Q78
• 字数: 5076字
• 语种: 中文

摘要

本文以用200mmol／LNaCl处理24h后的秋茄幼苗为材料提取秋茄叶片总RNA，利用RT-PCR方法克隆获得KcRD22基因的全长cDNA，通过构建pCAMBIA-2300-KcRD22过表达载体，利用农杆菌侵染的方式获得过表达KcRD22的烟草转基因株系，并对转基因株系的耐盐性做出初步分析。实验结果显示：KcRD22基因的ORF长1131bD，编码1个等电点为9．07、分子量为39．8kD、由375个氨基酸组成的蛋白。PCR及RT—PCR鉴定结果表明，KcRD22基因已经分别整合到8株烟草的染色体中，并在两个株系中获得表达。对转基因烟草进行光合作用测定，结果显示100mmol／LNaC1处理显著降低了野生型烟草的净光合速率，而转基因植株叶片的光合作用受到的影响较小。盐浓度达到200mmol／L时，转基因植株及野生型烟草净光合速率都明显降低，但盐胁迫解除后，转基因烟草光合作用的恢复情况明显好于野生型烟草，说明KcRD22的过表达提高了烟草的抗盐性。本文初步确定了KcRD22基因对植物耐盐性的贡献，这为进一步深入研究该基因在耐盐机制中的功能奠定了良好基础。