恒河猴白细胞介素-4基因的合成、原核表达及纯化

• 作者: 刘娟 刘新颖 史洪娜 李鼎锋 沈林 王冉 王维龙 陈丹 黄健
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 恒河猴 白细胞介素-4 基因合成 原核细胞 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1046-1049,1053
• 分类号: Q511|Q78
• 语种: 中文

摘要

目的 人工合成恒河猴白细胞介素-4( Macaca mulatta Interleukin-4,Mamu IL-4)基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化.方法 根据大肠杆菌遗传密码偏爱性优化设计并人工合成Mamu IL-4(mIL-4)基因,克隆入pET43.1a(+)表达载体,构建重组表达质粒pET43.1 a-mIL-4,转化大肠杆菌BL21-CodonPIus(DE3)-RIPL,经IPTG诱导表达.通过阳离子交换层析及稀释复性等步骤对表达的重组mIL-4蛋白进行纯化,纯化产物经Western blot进行鉴定.结果 双酶切及测序证实重组表达质粒pET43.1a-mIL-4构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在,经纯化复性后纯度可达95%以上；Western blot检测其能与鼠抗mIL-4单克隆抗体特异性结合.结论 在大肠杆菌中高效表达了重组mIL-4蛋白,纯化的蛋白纯度较高,为其生物学活性及佐剂的相关研究奠定了基础.