Myostatin基因沉默绵羊成纤维细胞系的建立

• 作者: 吴健敏 唐大运 朱化彬 杜卫华 林秀坤 王栋 赵学明 陈汉忠
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 肌肉生长抑制素 RNA干扰 慢病毒 绵羊成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1368-1373
• 分类号: S826|S814.8
• 字数: 4835字
• 语种: 中文

摘要

旨在获得肌肉生长抑制素( Myostatin,MSTN)基因沉默的成纤维细胞系,为进一步探索Myostatin的调控机理,获得Myostatin的基因沉默的转基因羊奠定基础.针对小尾寒羊Myostatin的基因序列,设计4条siRNA干扰序列,构建pSilencer干扰载体,转染成纤维细胞,采用RT-PCR进行筛选；构建慢病毒干扰载体,包装病毒,感染成纤维细胞,采用流式细胞技术分选阳性细胞,阳性细胞予以测序鉴定并检测沉默效果.结果,获得Myostatin基因沉默效率约90％的RNA干扰片段PSL1,包装病毒获得滴度为1×108的病毒颗粒,流式细胞技术分选得到纯度达99％的Myostatin基因沉默成纤维细胞系.采用慢病毒感染接合流式细胞术分选,能较快获得无抗性标记的转基因阳性细胞系,为培育Myostatin基因沉默的转基因羊及探索Myostatin的调控机理奠定基础.