6株抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体的鉴定及初步应用

• 作者: 余传信 宋丽君 张伟 殷旭仁 王玠 许永良 钱春艳
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 活动性感染 14-3-3蛋白 单克隆抗体 诊断
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 65-70
• 分类号: R383.24
• 字数: 4999字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2011.01.016

摘要

目的 对6株抗日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3单克隆抗体生物学特性进行鉴定,并探讨其在血吸虫病诊断中的应用价值.方法 采用酶联免疫吸附试验及免疫印迹法对6株单克隆抗体的类和亚类、腹水效价、亲和常数、检测灵敏度和特异性进行测定与鉴定.建立检测日本血吸虫感染兔血清14-3-3蛋白的Dot-ELISA方法,对感染兔吡喹酮治疗前、后不同时间的配对血清中14-3-3蛋白含量的动态变化进行观察,并通过对一批血吸虫感染兔血清样本进行检测,以评价该方法的诊断价值.结果 6株抗日本血吸虫信号蛋白14-3-3单克隆抗体3F1、3F7、5C6、5D1、5G9、IG6的抗体亚类分别为IgG1、IgC2a、IgC2b、IgG1、IgG1和IgG1;腹水单克隆抗体效价分别为1:6.4×105、1:8.0×105、1:6.4×105、1:3.2×105、1:4.8×105和1:2.0×104;亲和常数分别为8.82×108、4.93×108、1.56×108、5.12×108、1.41×108 mol/L和2.30×107 mol/L; Dot-ELISA方法检测14-3-3蛋白的灵敏度分别为1、10、100、10、10 ng和100 ng.免疫印迹试验结果表明,6株单克隆抗体均可与体外重组表达纯化的日本血吸虫14-3-3蛋白特异性结合,同时也能与日本血吸虫可溶性虫卵抗原、成虫排泄分泌抗原和成虫抗原中的天然14-3-3蛋白特异性反应,而与大肠埃希菌和华支睾吸虫抗原均无明显交叉反应.以单抗3F1和5D1为检测抗体建立的Dot-ELISA方法检测日本血吸虫感染兔治疗前、后不同时间点血清,发现随着感染时间的延长,兔血清中14-3-3蛋白含量逐渐增加,吡喹酮治疗后兔血清中14-3-3蛋白含量逐渐降低.采用此Dot-ELISA方法检测42份血吸虫感染兔血清,41份阳性,敏感性为97.6%;10份健康兔血清均为阴性,特异性为100010.结论 6株单克隆抗体均能有效识别天然的日本血吸虫信号蛋白14-3-3,初步证明以单抗3F1和5D1为检测抗体建立的Dot-ELISA方法具有一定的日本血吸虫活动性感染诊断及潜在的疗效考核价值.