牛乳腺炎无乳链球菌Pgk基因抗原优势区原核表达产物的抗原性分析

• 作者: 刘燕 吴金花 唐吉思 孙立杰 布日额 张忠祥 张海宝 王学理 锡林高娃
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 无乳链球菌 Pgk基因 原核表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 细菌
• 页码范围: 39-44
• 分类号: S858.232.611|Q786
• 字数: 4519字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2011.01.007

摘要

为了探索牛乳腺炎无乳链球菌磷酸甘油酸激酶(Phosphoglycerate kinase,Pgk)基因编码蛋白的抗原性,根据GenBank公布的牛源无乳链球茵Pgk基因序列,设计并合成一对引物,通过PCR扩增出Pgk蛋白抗原优势区的编码序列,并对其进行克隆、测序、转化、诱导表达及抗原性鉴定.结果显示克隆的Pgk基因序列含有984 bp,编码328个氨基酸残基.临床分离株与GenBank上公布的B群无乳链球菌菌株Pgk基因(AE009948)核苷酸序列同源性为99.09%,氨基酸序歹同源性为99.69%.将扩增的Pgk基因片段克隆至原核表达载体pET30a (+)中,构建重组表达载体Pgk-pET30a(+),再将筛选的阳性重组质粒转化至BL21工程菌,经IPTG诱导获得部分可溶性表达Pgk重组蛋白.经Ni2+亲和层析柱纯化得到纯度在90%以上的蛋白,经Western blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步探索其对奶牛的免疫原性研究奠定了良好的实验基础.