Triapine对肝癌细胞株HepG2中GADD45β表达影响及其可能机制

• 作者: 彭承宏 施敏敏 李军 杨卫平 林大伟 汪洋 沈柏用 王佳玉 衣琳 覃胜灵 邱伟华
• 来源期刊: 外科理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 肝癌 3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲 GADD45β 启动子
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 481-487
• 分类号: R735.7
• 字数: 7036字
• 语种: 中文

摘要

目的:DNA损伤修复相关基因 GADD45β的特异性表达缺失与肝癌的恶性程度密切相关,本研究初步明确肝癌细胞中GADD45β近端启动子序列,探索3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲(Triapine)对人肝癌细胞株HepG2的GADD45β表达影响及其可能机制.方法:体外合成GADD45β近端启动子序列(-618至-314),构建荧光素表达质粒,转染HepG2,根据启动子活性强度结合数据库分析存在的转录调节因子结合位点；以实时荧光定量PCR比较Triapine作用前后HepG2细胞GADD45β表达；进一步比较Triapine对GADD45β启动子活性的调控作用,分析Triapine对HepG2的抑制效应；并通过Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展.结果:GADD45β近端启动子中含有3个NF-κB (-602/-593、-581/-572、-537/-528)和1个E2F-1 (-470/-436)转录调节因子与启动子结合位点；2.5μmol/L和5μmol/L的Triapine作用后,GA DD45β/GA PDH分别为0.029 3和0.073 9,呈现剂量-诱导效应正相关,同时NF-KB和E2F-1启动子活性分别增强了1.5和0.8倍；高剂量Triapine对HepG2的DNA合成能力和细胞克隆形成能力的抑制率分别为75.25％和60.54％,呈现剂量-抑制效应正相关；Triapine作用后6h即出现HepG2凋亡高峰.结论:Triapine能通过增强转录调节因子的活性,诱导肝癌细胞中特异性缺失的GA DD45β基因表达;进而抑制肝癌细胞的增殖并启动凋亡途径.