重叠延伸PCR法构建小菜蛾化学感受蛋白1基因突变体研究

• 作者: 任珍珍 刘晶晶 李珣 柳晓磊 胡美英 陈永
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 小菜蛾 化学感受蛋白1 重叠延伸PCR 原核表达 同源建模 分子对接
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 119-125
• 页数: 7页
• 分类号: Q965
• 语种: 中文

摘要

[目的]探索重叠延伸PCR法在昆虫化学感受蛋白基因点突变上的应用,研究半胱氨酸(Cys32)对小菜蛾(Plutella xylostella)化学感受蛋白1(PlxyCSP1)结合特性的影响.[方法]用计算机软件模拟PlxyCSP1上Cys32突变前后的蛋白三级结构以及与配体化合物的结合情况,确定点突变位点.根据扩增得到的PlxyCSP1序列设计并合成重叠引物,利用重叠延伸PCR法,将PlxyCSP1上的Cys32突变成色氨酸(Trp32),获得突变体PlxyCSP1-M.将突变后的基因与载体pET-32a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3).[结果]分子对接图显示,配体可以顺利进入PlxyCSP1的结合口袋,而无法进入PlxyCSP1-M的结合口袋.结合能预测显示,配体化合物与PlxyCSP1的结合能均为正值,与PlxyCSP1-M的结合能均为0.突变后的重组质粒测序结果表明,Cys32(TGC)已突变为Trp32(TGG),经IPTG诱导,该菌表达了分子质量约为36 ku的融合蛋白.[结论]Cys32是影响PlxyCSP1结构和功能的重要氨基酸残基.Cys32突变为Trp32后,PlxyCSP1-M结合特性发生了变化,不能与配体化合物正常结合.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡美英		144	2126	24.0	37.0
2	柳晓磊		5	14	2.0	3.0
3	陈永		17	129	8.0	10.0
4	刘晶晶		6	10	2.0	3.0
5	任珍珍		7	13	1.0	3.0
6	李珣		5	20	3.0	4.0