Ad-LIF-OSM双基因转染饲养细胞对脐血造血细胞体外增殖和分化的影响

• 作者: 包婉蓉 张凤娟 杨吉成 王家融 盛伟华 缪竞诚 郁心
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 白血病抑制因子 抑瘤素M 共表达载体 造血干/祖细胞
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 865-869
• 分类号: Q939.91
• 字数: 4456字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2011.10.001

摘要

目的 构建表达人白血病抑制因子(LIF)和抑瘤素M(OSM)双基因的WI-38人胚肺成纤维细胞,并以此细胞作为饲养层细胞观察其对CD34+.造血干/祖细胞体外增殖和分化的影响.方法 以双启动子转移载体pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoterΔ为基础,将OSM基因片段酶切后插入,构建出转移质粒pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoterΔ -OSM.将构建正确的转移质粒与腺病毒骨架质粒共转化,获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-LIF-polyA+promoter△-OSM,通过包装,收获重组腺病毒(AdLIF-OSM).将重组腺病毒感染饲养层细胞,经RT-PCR、ELISA法检测外源基因在细胞中的表达；体外与CD34+造血干/祖细胞共培养后,通过Transwell法和细胞计数检测,比较各实验组干/祖细胞体外扩增与分化情况.结果 测序结果显示重组载体中的LIF和OSM基因序列正确；转基因饲养层细胞中能检测到外源LIF和OSM基因的转录和表达；外源LIF和OSM基因在造血干/祖细胞体外培养中能够发挥作用.结论 成功构建携带人LIF和OSM的双基因重组腺病毒载体(Ad-LIF-OSM),Ad-LIF-OSM在造血干/祖细胞体外培养的过程中能够有效地扩增CD34+造血干/祖细胞,并延缓其分化.