鲢鱼小清蛋白的分离纯化及其单克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘光明 刘源 曹敏杰 杜雪莉 王锡昌 蔡秋凤
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 小清蛋白 鲢鱼 单克隆抗体 纯化 特异性
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 731-734,738
• 分类号: S917
• 字数: 3972字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.08.012

摘要

目的:制备抗鲢鱼主要过敏原小清蛋白的单克隆抗体,并对其基本特性进行鉴定.方法:采用硫酸铵盐析、离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析等方法纯化鲢鱼小清蛋白;以纯化的小清蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗鲢鱼小清蛋白单克隆抗体;通过ELISA法确定抗体亚型;通过腹水诱生法大量制备单克隆抗体;以Protein G Sepharose亲和层析柱纯化制备的单克隆抗体;运用Western blot鉴定单克隆抗体的特异性;以ELISA法分析单克隆抗体的结合位点.结果:从100 g鲢鱼肌肉中可获得约30 mg高纯度小清蛋白;SDS-PAGE结果表明,得到的抗小清蛋白单克隆抗体(A4-C1)纯度较高,亚类为IgG1;Western blot结果显示,A4-C1只与鱼肉粗提物中的小清蛋白产生反应,特异性良好;ELISA分析表明,制备的抗鲢鱼小清蛋白单克隆抗体与商品化抗蛙小清蛋白单克隆抗体(PARV-19)的结合位点可能具有很大部分的重叠,或者存在较大的空间位阻效应.结论:研究中制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌高特异性的抗鲢鱼小清蛋白单克隆抗体,可用于后续淡水鱼类小清蛋白检测方法的建立.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡秋凤	上海海洋大学食品学院	5	51	4.0	5.0
2	曹敏杰	集美大学生物工程学院	85	824	18.0	23.0
3	刘光明	集美大学生物工程学院	68	501	13.0	18.0
4	刘源	上海海洋大学食品学院	125	1972	27.0	36.0
5	杜雪莉		13	68	5.0	7.0
6	王锡昌	上海海洋大学食品学院	281	3516	32.0	42.0