重组抗菌肽 S-thanatin 的表达纯化及不同MIC鉴定方法对其结果的影响

• 作者: 吴国球 奚涛 李小芳 沈子龙 王升兰 王西勇 薛秀蕾 邓学鹏
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 抗菌肽S-thanatin 大肠杆菌 表达纯化 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 306-311
• 分类号: R965.2
• 字数: 4701字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2011.02.008

摘要

目的:获得重组抗菌肽S-thanatin (Ts) 在大肠杆菌的可溶性表达及分离纯化方法,通过不同方法鉴定Ts的最低抑菌浓度(MIC),揭示不同方法对结果的影响. 方法:利用基因重组手段构建表达质粒pET32a-Ts,转化大肠杆菌BL21(DE3),可溶性表达Ts融合蛋白,利用镍柱亲和层析纯化出融合蛋白,透析以后经凝血酶酶切,再通过葡聚糖凝胶G-50纯化除去融合伴侣TRX,最后冻干精制得到Ts冻干粉.利用玻璃管的常量肉汤稀释法、聚苯乙烯和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法和MH琼脂打孔法测定阳离子肽Ts的抑菌活性.结果:Ts 在大肠杆菌中成功可溶性表达并获得85%以上纯度的目的蛋白.不同测定方法显示,Ts对同一菌株具有不同的MIC,以常量肉汤稀释法和聚丙烯96孔板的微量肉汤稀释法测定的多肽抑菌活性效果最佳.结论:Ts在工程菌BL21(DE3)中得到高表达,纯化出后具有较高的抑菌生物活性.不同方法测定出差异化MIC表明,阳离子肽Ts的抑菌活性易受实验材料材质影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	奚涛	中国药科大学生命科学与技术学院	138	927	15.0	25.0
2	沈子龙	中国药科大学生命科学与技术学院	86	688	11.0	23.0
3	王西勇	东南大学医学院	5	21	2.0	4.0
4	邓学鹏	中国药科大学生命科学与技术学院	5	8	2.0	2.0
5	王升兰	中国药科大学生命科学与技术学院	2	3	1.0	1.0
6	李小芳	中国药科大学生命科学与技术学院	2	3	1.0	1.0
7	薛秀蕾	东南大学医学院	5	13	2.0	3.0