改良法分离培养兔骨髓源性早晚期内皮祖细胞

• 作者: 姜志胜 张凯 李爽 杨简 王仁 王佐 苏维
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮祖细胞 单个核细胞 兔骨髓 密度梯度离心法 差速贴壁法
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 方法学研究
• 页码范围: 865-869
• 分类号: R363
• 语种: 中文

摘要

目的 探索简单有效分离培养兔骨髓源性内皮祖细胞的方法,并比较两种内皮祖细胞生物学性状.方法 4周龄左右的新西兰兔,于每侧胫骨取骨髓2mL,密度梯度离心后取单个核细胞接种于培养瓶,48h后将悬浮的细胞收集再次贴壁,血管内皮生长因子诱导其向内皮祖细胞分化.免疫细胞化学鉴定其表面标志物、免疫荧光功能学测定,对比前后两种贴壁细胞生长状况.结果 早期获取的单个核细胞,半小时后就开始贴壁,3天左右即可长出长梭形的细胞,胞体较大,有血岛样克隆形成,随后培养可形成管腔样结构,10天左右即可呈漩涡状融合整个培养瓶,但这种细胞传代能力差,为早期内皮祖细胞;第2次贴壁的晚期细胞于贴壁后呈椭圆形生长,贴壁后5-7天即可出现集落,片状生长,最后呈铺路石样融合,并可连续传至10代以上,为晚期内皮祖细胞.第2次贴壁的内皮祖细胞在分化过程中明显失去CD133+,而CD34+表达有所升高,大部分第1次贴壁内皮祖细胞可以吞噬乙酰化低密度脂蛋白和荆豆凝集素1,第2次贴壁内皮祖细胞功能学鉴定结果与第1次贴壁的结果类似.结论 改良后的密度梯度离心法结合差速贴壁法能有效分离培养兔骨髓源性内皮祖细胞,第2次贴壁的内皮祖细胞生长能力更强.