重组蓖麻、相思子毒素A链嵌合突变体的制备与分析

• 作者: 康琳 张弢 王景林 辛文文 韩艳辉 高姗
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 蓖麻毒素 相思子毒素 突变体 嵌合体 抗原性
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 453-457
• 分类号: Q78
• 字数: 3787字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.04.001

摘要

目的:构建蓖麻毒素(RIC)、相思子毒素(ABR)A链突变体的嵌合体蛋白,实现嵌合体蛋白的可溶性表达、纯化及杭原性分析.方法:采用柔性linker连接RICA链突变体(mRICAD75AV76MY80A)和ABR A链突变体(mABRAE164AR167L),构建嵌合体基因mRICA/mABRA,将该嵌合体基因亚克隆至原核载体pQE80L构建表达质粒pQE80L-mRICA/mABRA,再转化至大肠杆菌M15获得表达工程菌株M15/pQE80L-mRICA/mABRA,工程菌在18℃经0.1mmol/L的IPTG诱导14h,表达的嵌合体蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,通过ELISA和Western印迹检测嵌合体蛋白的抗原性.结果:所获得的mRICA/mABRA嵌合体基因经一致性比对分析,与预计嵌合基因的序列一致性为100%,其开放读框全长1572bp,编码524个氨基酸残基;重组表达质粒PQE80L-mRICA/mABRA经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,嵌合体蛋白相对分子质量约为62x103,与预测相符,可溶性的嵌合体蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化,纯度可达99%;间接ELISA和Western印迹结果表明,嵌合体蛋白能同时与抗RIC多克隆抗体和杭ABR多克隆抗体发生特异的抗原抗体反应.结论:得到的mRICA/mABRA嵌合体蛋白具有良好的抗原性,为研制新型RIC和ABR双价疫苗奠定了重要基础.