甘蓝型油菜烯脂酰-CoA还原酶基因BnECR的克隆及功能分析

• 作者: 倪郁 张飞萃 李加纳 柴友荣 王亚超 王瑞 蒲飞
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 甘蓝型油菜 烯脂酰CoA还原酶 克隆 芥酸 酿酒酵母
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 页码范围: 424-432
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724,SP.J.1006.2011.00424

摘要

反式烯脂酰-CoA还原酶(trans-2,3-enoyl-CoA reductase,ECR)是催化超长链脂肪酸(VLCFAs)合成的脂肪酰-CoA延长酶之一.根据已报道拟南芥ECR基因设计引物.采用RACE(rapid amplification of cDNA ends)方法从甘蓝型油菜中克隆ECR的全长cDNA序列和对应的基因组序列,命名为BnECR(GenBank登录号分别为FJ899705和FJ899706).序列分析结果显示,BnECR的全长cDNA序列为1 328 bp,对应的基因组序列为2 093 bp,由4个外显子组成,在ORF的上、下游分别有一个163 bp的5UTR和一个232 bp的3q3TR.根据编码区预测BnECR前体蛋白为一个310个氨基酸残基的多肽链,包含ECR蛋白的重要功能位点K144、R145及一个NAD(P)H结合基序G225SGGYQIPR/HG234.NCBI Blastn、氨基酸序列多重比对及保守域分析表明,该基因与拟南芥AtECR基因的同源性最高,是对应拟南芥AtECR的垂直同源基因.RT-PCR分析表明,BnECR基因在甘蓝型油菜根、茎、叶、花及角果中均有表达,其中在茎中的表达量最高.BnECR在高芥酸材料种子发育中后期的表达量显著高于低芥酸种子,表明BnECR可能参与甘蓝型油菜芥酸的合成.将BnECR克隆到酿酒酵母的穿梭表达载体中,分别转化野生型酵母By4743和突变体菌株YDL015c,添加半乳糖诱导表达.气相色谱分析表明,BnECR在酿酒酵母中有效表达,转化菌株中的芥酸(C22:1)di总脂肪酸含量的1.34%.比对照增加52%;对突变体的转化结果表明芥酸含量恢复到野生型水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李加纳	西南大学农学与生物科技学院	82	981	17.0	28.0
2	柴友荣	西南大学农学与生物科技学院	22	191	6.0	13.0
3	王瑞	西南大学农学与生物科技学院	44	308	8.0	16.0
4	倪郁	西南大学农学与生物科技学院	21	279	10.0	16.0
5	张飞萃	西南大学农学与生物科技学院	1	6	1.0	1.0
6	王亚超	西南大学农学与生物科技学院	1	6	1.0	1.0
7	蒲飞	西南大学农学与生物科技学院	1	6	1.0	1.0