Tet-on慢病毒调控系统的构建及其调控作用

• 作者: 张志谦 赵威 韩海勃
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 四环素 慢病毒 基因调控 基因工程 基因克隆 荧光显微术
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 细胞和分子生物学
• 页码范围: 756-760
• 分类号: Q789
• 字数: 2785字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-1356.2011.06.008

摘要

目的 构建四环素诱导基因表达的3代慢病毒系统,为慢病毒介导的基因治疗提供实验依据.方法 将四环素调控的转录激活因子(rtTA和M2rtTA)分别克隆入带有新霉素(neo)筛选标记的慢病毒载体中,得到pELNS-rtTA-IRES-Neo和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo质粒,将四环素顺式应答作用元件(TETO和TREpitt)和绿色荧光蛋白(GFP)克隆入带有杀稻瘟素(blasticidin)筛选标记的慢病毒载体中,得到plenti6-TETO-GFP和plenti6-TREpitt-GFP质粒,将pELNS-rtTA-IRES-Neo与plenti6-TETO-GFP和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo与plenti6-TREpitt-GFP分别以10∶1共同转染293细胞,用四环素类似物强力霉素(Dox)诱导GFP基因表达,48h后检测GFP表达.结果 成功构建了1代四环素调控体系pELNS-rtTA-IRES-Neo和plenti6-TETO-GFP重组质粒.共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为90%,而未加Dox组细胞GFP阳性表达率约为30%.成功构建了2代四环素调控体系pELNS-M2rtTA-IRES-Neo和plenti6-TREpitt-GFP重组质粒.共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为95%,而未加Dox组细胞未见GFP表达.结论 2代四环素调控体系3代慢病毒系统可以高效诱导目的基因表达,且目的基因背景表达值低.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩海勃		4	9	1.0	3.0
2	张志谦		2	8	1.0	2.0
3	赵威		4	3	1.0	1.0