人肝细胞生长因子在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

• 作者: 刘晓军 常冰梅 张悦红 张栋 李美宁 牛勃 程牛亮
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞生长因子 毕赤酵母 肝细胞 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 903-906,910
• 分类号: Q786|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 在毕赤酵母中分泌表达人肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF),并检测其活性.方法 从真核表达质粒pRC / CMV-HGF中扩增HGF的编码基因,将其克隆人表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-HGF,电穿孔法转化毕赤酵母菌株KM71,PCR筛选阳性菌株,经甲醇诱导表达重组人HGF(rhHGF).表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,检测其对原代培养的大鼠肝细胞增殖的影响.结果 重组表达质粒pPIC9K-HGF经酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约80000,表达量占菌体总蛋白的18%,可与兔抗人HGF多抗特异性结合,并可刺激大鼠肝细胞增殖.结论 在毕赤酵母菌中成功分泌表达了rhHGF,表达产物具有促进肝细胞增殖的活性.