摘要:
目的 通过复制离体和在体不同程度的急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)动物模型,动态观测胰腺组织中热休克蛋白60(heat shock protein60,HSP60)和胰蛋白酶(Trypsin)表达的变化.探讨它们在AP发病机制中的可能作用.方法 采用雨蛙肽(cerulein,Cer)50μg·kg-1·h-1,连续6次腹腔注射复制小鼠轻型急性胰腺炎(mild acute pancreatids,MAP)模型,正常对照组小鼠以等体积生理盐水(normal saline,NS)替代雨蛙肽腹腔注射,其他操作同MAP组.于造模后3 h麻醉处死动物,留取各组小鼠胰腺组织标本.重型急性胰腺炎(severe acutepancreatitis,SAP)大鼠模型用3%去氧胆酸钠(1 ml·kg-1体质量)胰胆管逆行推注而复制,造模后1、5、10 h分别处死动物,取各大鼠胰腺组织标本.大鼠离体胰腺组织块参照Jaffrey等的方法分离培养,用不同浓度的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(10、20μg·ml-1)、雨蛙肽(10-11、10-5mol·L-1)刺激,以NS作为对照,在刺激后的4 h收集组织标本.采用HE染色观察AP时胰腺组织病理学改变.通过双重免疫荧光技术检测HSP60和胰蛋白酶在胰腺组织中表达的变化.结果 MAP小鼠胰腺组织呈现轻度充血水肿性病理改变,组织中HSP60和胰蛋白酶表达在造模组表达明显升高(P<0.01).SAP大鼠的胰腺组织出血坏死性改变明显,HSP60在造模后1 h即明显升高,在造模后5、10h一直持续在一定的高水平,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但在这几个时间点之间,HSP60的表达无明显差异(P>0.05);而胰蛋白酶表达水平在SAP大鼠1 h组稍有升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P>0.05),但随着造模时间延长,其水平呈不断升高的趋势,与对照组的比较,差异有统计学意义(P<0.05).离体胰腺组织在LPS高、低浓度和雨蛙肽低浓度刺激下HSP60和胰蛋白酶的表达明显降低(P<0.05).结论 在本实验条件下,实验性急性胰腺炎无论轻、重型,胰腺组织中的胰蛋白酶表达升高的同时,HSP60也增高,但HSP60和胰蛋白酶升高的幅度在不同严重程度胰腺损伤时是不同的,表明AP时HSP60和胰蛋白酶的失衡可能参与该病的发生发展.LPS等刺激因子损伤离体胰腺组织,HSP60和胰蛋白酶的表达均降低.