梅毒螺旋体Tp0136活性肽段的可溶性表达、纯化及鉴定

• 作者: 孙琦 张小贤 杨珺 沈琳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 梅毒螺旋体 Tp0136 活性肽段 可溶性表达 免疫活性
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 119-123
• 分类号: R75
• 字数: 3867字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2011.02.006

摘要

目的 筛选梅毒螺旋体特异性抗原Tp0136的活性肽段,可溶性表达和纯化该肽段,并鉴定其免疫活性,探索Tp0136活性肽段在早期梅毒诊断中的价值.方法 通过生物信息学方法对Tp0136亲水性、B细胞表位和二级结构等进行分析,筛选出Tp0136活性肽段(Tp0136B)替代全蛋白.将Tp0136B基因插入到pET22b(+)上,在E.coli BL21中表达.镍离子亲和色谱纯化表达产物,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以重组Tp0136B蛋白为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体.结果 重组工程菌可溶性表达相对分子质量约为28×103的rTp0136B,表达率为21%,制备得到纯度大于98%的rTp0136B.纯化的rTp0136B能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1:16.Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为85.5%.结论 重组表达的Tp0136活性肽段具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙琦		20	69	5.0	8.0
2	杨珺		12	32	4.0	5.0
3	张小贤		14	54	4.0	7.0
4	沈琳	杭州市第三人民医院检验科	7	22	3.0	4.0