重组人PRL-3蛋白的表达、鉴定和酶动力学分析

• 作者: 何太平 梁念慈
• 来源期刊: 广东医科大学学报
• 关键词: PRL-3 蛋白表达 酶动力学
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 359-363
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2011.04.002

摘要

目的 构建融合蛋白pCold Ⅱ-His-PRL-3表达质粒,并进行诱导表达、纯化、鉴定和酶动力学分析.方法 通过基因重组技术构建pCold Ⅱ-His-PRL-3融合蛋白表达载体,并在ArcticExpress E.Coli中表达融合蛋白.经Ni2+-NTA层析纯化,PRL-3蛋白用SDS-PAGE和Western blot初步鉴定,基质辅助激光解吸/电离直角型飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)确证,并进行酶动力学分析.结果 重组载体pCold Ⅱ-His-PRL-3包含正确的PRL-3编码序列,经IPTG诱导后能正确表达融合蛋白,Western blot显示表达蛋白具有抗原性,质谱分析结果显示目的蛋白氨基酸序列与PRL-3蛋白完全相符.PRL-3酶的米氏常数Km为6.59μmol/L,催化常数Kcat为0.44 min-1.结论 构建的pCold Ⅱ-His-PRL-3重组载体可表达具有酶活性的PRL-3蛋白,为PRL-3酶抑制剂的筛选奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何太平	广东医学院营养与食品卫生学教研室	44	353	10.0	17.0
2	梁念慈		18	216	8.0	14.0