猪干扰素α和γ在杆状病毒中共表达及对PRRSV抑制作用

• 作者: 孙向丽 崔保安 杨明凡 王彦彬 陈红英 魏战勇
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 干扰素 杆状病毒 表达 繁殖与呼吸综合征病毒
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 1931-1938
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.09.021

摘要

[目的]制备复合型猪干扰素α和γ进行应用抗病毒研究.[方法]本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码猪干扰素α和γ成熟蛋白基因插入供体质粒pFastBacDual,分别置于PH和P10启动子控制下,引入蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,HBM)基因取代猪干扰素α和γ原有信号肽基因以实现分泌型表达,并在C端分别融合6个组氨酸标签以利于纯化.将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.重组杆状病毒感染昆虫细胞,鉴定重组蛋白的活性.[结果]通过问接免疫荧光、Western-blot证明猪干扰素α和γ重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中均获得表达,表达产物主要分布在培养上清中.通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性,结果表明:昆虫细胞上清的抗病毒效价达到3.24×10<'7>U·mL<'-1>.在Marc-145细胞,昆虫细胞上清经2<'-11>稀释能够抑制100个TCID<,50>的PRRSV的致细胞病变作用.[结论]应用杆状病毒表达系统实现猪干扰素α和γ在昆虫细胞上分泌共表达,重组蛋白在细胞上对PRRSV具有抑制作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔保安		274	2313	25.0	33.0