表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶的重组腺病毒的构建及其免疫原性

• 作者: 严敏 孙茂盛 李太华 李鸿钧 王文举 谢天宏
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 流感病毒A型,H1N1亚型 神经氨酸酶 重组腺病毒 免疫原性
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1264-1268,1277
• 分类号: R373.1+3|R392-11
• 语种: 中文

摘要

目的 构建表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的重组腺病毒,并检测其免疫原性.方法 从质粒pMD19T-simple-NA中扩增NA基因,克隆至穿梭质粒pShuttleCMV中,经同源重组获得重组腺病毒质粒,转染Ad-293细胞,包装出重组腺病毒Ad-NA,RT-PCR和免疫荧光法检测NA基因在Vero细胞中的转录和表达.CsCl密度梯度离心纯化重组腺病毒,免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清中抗NA抗体滴度.结果 重组腺病毒质粒经Pac Ⅰ酶切鉴定表明带有目的基因的穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中；NA基因在Vero细胞中成功转录和表达；重组腺病毒可刺激小鼠产生抗NA抗体,初免后4周,抗体水平达最高,为1∶100000.结论 成功构建了表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白的重组腺病毒,其可刺激小鼠产生有效的免疫应答,为甲型H1N1流感病毒基因工程疫苗的研发奠定了基础.