前列腺癌特异性启动子P(A)PTp的构建及评价

• 作者: 严俊 吴祖泽 李庆芳 杨月峰 王华 王立生 王荣亮 肖凤君
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺肿瘤 特异性启动子P(A)PTp 基因表达 腺病毒科 绿色荧光蛋白质类 流式细胞术 细胞系,肿瘤
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 165-170
• 分类号: R737.25
• 字数: 4683字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2011.03.002

摘要

目的 构建前列腺癌特异性启动子PSAe (AREc)-PSMAe-TARPp[P(A)PTp],并在腺病毒水平评价其启动目的 基因表达的效率和特异性.方法 巢式PCR扩增基因组DNA获得PSAe的AREc区基因、PSMAe基因和TARPp基因,并依次连接获得嵌合启动子P(A)PTp.采用Adeasy系统构建并制备P(A)PTp启动增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)表达的重组腺病毒Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP.不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的Ad-pSh-CMV-EGFP感染各细胞系后48 h,流式细胞术确定最佳MOI;并以最佳MOI的Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP感染各细胞系,检测EGFP的表达效率.结果 PCR成功扩增并连接获得嵌合启动子基因P(A)PTp.采用Adeasy系统,构建并制备了重组腺病毒Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP.Ad-pSh-CMV-EGFP感染后,流式检测结果显示,前列腺癌细胞PC3和PC3M细胞的最佳MOI为100 MOI;而前列腺癌细胞DU145以及肝癌细胞SMMC-7721和HepG2为250 MOI.最佳MOI的Ad-pSh-P(A)PTp-EGFP感染后,EGFP在各细胞系中的表达效率[P(A)PT vs CMV]为:PC3(25.56%vs 77.76%)、DU145(50.50%vs 65.26%)、PC3M(30.81%vs 89.70%)、HepG2(6.26%vs 63.76%)、7721(2.27%vs 67.84%).结论 成功构建前列腺癌特异性嵌合启动子P(A)PTp,并证实能在前列腺癌细胞中特异并有效地启动EGFP的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴祖泽	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	153	1469	18.0	31.0
2	王华	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	68	439	13.0	17.0
3	肖凤君	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	18	72	6.0	7.0
4	杨月峰	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	11	20	2.0	4.0
5	李庆芳	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	15	61	4.0	7.0
6	严俊	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	4	7	2.0	2.0
7	王荣亮	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	4	17	2.0	4.0