hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定

• 作者: 朱亚勤 郑倩倩 郭文东
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠三叶因子 克隆 表达载体
• 年，卷（期）: 2011,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 877-880
• 分类号: Q291
• 字数: 2752字
• 语种: 中文
• DOI: 21-1227/R.20111019.1725.024

摘要

克隆人肠三叶因子基因TFF3,构建重组真核表达载体pEGFP-C 1-TFF3,并在真核细胞中表达.方法 应用逆转录聚合酶链式反应( RT-PCR)技术,从真核细胞中扩增得到人TFF3的全长序列,克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中,经酶切、PCR鉴定后测序证实克隆成功.将重组载体转至真核细胞,荧光显微镜观察下转染效率,同时采用RT-PCR、Western blot技术检测外源基因TFF3的表达.结果 成功将hTFF3基因克隆到真核表达载体中,酶切片段与预期大小一致(200 bp).在荧光显微镜下观察转染后的细胞可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot结果表明:转染后的细胞中TFF3在转录和翻译水平的表达均有明显提高.结论 成功构建了真核表达载体pEGFP-C1 -TFF3,并在真核细胞中显著表达,为进一步研究TFF3因子的生物学功能奠定了基础.