应用重组MSG1蛋白检测猪附红细胞体抗体的EL ISA检测方法的建立

• 作者: 刘建柱 刘永夏 刘海涛 周栋 成子强 柴同杰 王振勇 王林
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪附红细胞体 MSG1 ELISA 建立
• 年，卷（期）: 2011,（21）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 4508-4515
• 分类号: S858.28
• 语种: 中文

摘要

[目的]针对猪附红细胞体91基因编码的MSG1表面粘附蛋白(rMSG1)和以此蛋白制备的多克隆抗体,建立相应的ELISA方法进行猪附红细胞体的临床检测,并进行效果评估,以获得一种猪附红细胞体感染的有效检测手段.[方法]将MSG1-pET28c_E coliBL21菌株,在适宜的条件进行诱导表达,经菌体破碎、层析等步骤获取纯化的目的蛋白.以纯化的rMSG1制备免疫原接种小鼠,获取符合要求的多克隆抗体.以rMSG1和多克隆抗体建立ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、符合性和重复性.[结果]接种后获得了符合效价的抗血清；基于rMSG1的间接ELISA方法临床检测猪附红细胞体感染率为46.25％,其中阳性样本对已知小鼠抗血清有明显的阻断作用,并且与其它一些抗原无交叉反应；此ELISA方法的特异性和敏感性分别可达到97.06％和95.92％,较间接血凝试验(IHA)有更高的检出率.[结论]结果显示MSG1具有良好的抗原性,建立的ELISA方法具有较高的敏感性、特异性、符合性和可重复性,在临床检测中可以取得理想的效果.