ABCE1基因siRNA稳定转染小细胞肺癌细胞株阳性克隆的筛选

• 作者: 王晓东 郎贤平 黄波
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 小细胞肺癌 ABCE1基因 siRNA
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 8-11
• 分类号: R734.2
• 字数: 3214字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带绿色荧光蛋白的ABCE1基因的siRNA表达载体,通过将载体转染入小细胞肺癌细胞株NCI-H446,筛选稳定转染细胞株.方法 根据ABCE1的DNA序列设计3对siRNA引物,构建可用于筛选阳性克隆且带有绿色荧光的ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-1、ABCE1-PRNAT-U6.1/Neo-siRNA-2及ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA-N,采用FUGENE-HD法将载体转染入NCI-H446细胞中,并以G418进行阳性克隆筛选,筛选ABCE1基因沉默的稳定转染细胞系.结果 经酶切和DNA测序验证,证实ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA表达栽体构建成功.将ABCE1基因siRNA表达载体成功转染小细胞肺癌细胞NC1-H446后,小细胞肺癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了ABCE1基因沉默的小细胞肺癌细胞系.该细胞系的ABCEl水平明显低于未转染siRNA的小细胞肺癌细胞.结论 成功的构建了ABCE1基因siRNA表达载体ABCE1-pRNAT-U6.1/Neo-siRNA.筛选出ABCE1基因沉默的稳定转染小细胞肺癌细胞系,为今后应用ABCE1基因siRNA表达载体研究ABCE1基因的作用机制提供实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄波	辽宁医学院附属第一医院胸外科	25	61	5.0	7.0
2	王晓东	辽宁医学院附属第一医院胸外科	33	131	7.0	9.0
3	郎贤平	辽宁医学院附属第一医院胸外科	15	47	4.0	6.0