脂肪分化相关蛋白真核表达载体的构建及其对H9c2心肌细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 丁薇 周丽诺 方舟 胡仁明 鲍苑苑
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脂肪分化相关蛋白质 H9c2细胞 棕榈酸 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 223-228
• 分类号: R589.2
• 字数: 4687字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.02-003

摘要

目的:构建编码脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein, ADRP)基因全长序列的真核表达载体,探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响.方法:(1)RT-PCR扩增编码ADRP全长的 DNA 序列,重组入pEGFP-C1质粒表达载体中,酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α,挑取阳性克隆,扩增后提取质粒并进行鉴定;采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒稳定转染H9c2心肌细胞;荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达情况;RT-qPCR和Western blotting检测ADRP表达情况;(2)采用MTT比色法和流式细胞术检测不同浓度软脂酸对细胞增殖和凋亡的影响.结果:(1)成功构建了真核质粒表达载体pEGFP-C1-ADRP,转染H9c2细胞后,荧光显微镜下观察发现细胞内有绿色荧光蛋白表达;RT-qPCR和Western blotting显示重组质粒转染H9c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P＜0.01);(2)经不同软脂酸刺激后,重组质粒转染H9c2细胞增殖抑制率和凋亡率均明显低于空质粒转染组和正常对照组(P＜0.05).结论:(1)成功获得了稳定表达ADRP的H9c2心肌细胞株;(2)软脂酸可抑制H9c2心肌细胞增殖并可诱导其凋亡,而ADRP高表达可对抗软脂酸的这一作用,表明ADRP对高脂环境中心肌细胞可能具有一定的保护作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡仁明	复旦大学附属华山医院内分泌科	80	561	13.0	20.0
2	周丽诺	复旦大学附属华山医院内分泌科	26	146	7.0	11.0
3	方舟	复旦大学生命科学院	6	48	4.0	6.0
4	鲍苑苑	复旦大学附属华山医院内分泌科	3	0	0.0	0.0
5	丁薇	复旦大学附属华山医院内分泌科	2	0	0.0	0.0