弓形虫529 bp重复序列基因的PCR阳性质控质粒的构建

• 作者: 孙新 方强 焦玉萌 王雪梅 陈兴智
• 来源期刊: 蚌埠医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 重组质粒 529 bp高度重复序列 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 1-3
• 分类号: R382.5
• 字数: 3041字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2200.2011.01.001

摘要

目的:构建含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒,为基于该基因的弓形虫病分子生物学诊断建立标准阳性对照品.方法:以弓形虫RH株基因组DNA为模板,对529 bp的基因片段进行扩增,将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转入大肠埃希菌DH-5α中,提取重组质粒PCR及测序鉴定.以弓形虫529 bp基因为靶基因设计的检测引物,扩增弓形虫基因组DNA及质粒DNA.结果:PCR产物序列与GENBANK中弓形虫529 bp基因序列完全一致.以弓形虫基因组DNA和质粒DNA为模板,成功扩增出预期的249bp基因片段.结论:成功构建可作为标准阳性对照品的含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒pMD-18-Tox,为经济实用的弓形虫诊断试剂盒的研制奠定了基础.