长片断引物反向PCR方法构建重复序列的重组质粒

• 作者: 刘亚娟 刘亮伟 刘猛 徐文选 贺添艳
• 来源期刊: 河南科学
• 关键词: 长片断引物 反向PCR 重组质粒 构建
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 生命科学与农业科学
• 页码范围: 501-505
• 页数: 5页
• 分类号: Q556
• 语种: 中文

摘要

构建重复序列的重组质粒比较困难,因为扩增重复序列会产生多聚物.利用长片断引物反向PCR方法构建重组质粒pET20b-C1-Xyn-C1,将碳水化合物结合模块C1连接在木聚糖酶Xyn两端,为类似质粒的构建提供新方法.第一步,以C1特异性正向引物LF、载体特异性反向引物VRP从pET20b-Xyn-C1模板上扩增C1-pET20b长片断DNA,作为第二步的正向引物;第二步,以pET20b-C1-Xyn为模板,Xyn特异性反向引物RX,正向引物与模板上pET20b同源区域匹配,阻止了模板上C1同源区域的匹配,从而抑制多聚物产生;反向PCR扩增得到线性重组质粒C1-pET20b-C1-Xyn,将此线性产物用T4 DNA连接酶连接后转化DH5α感受态细胞,得到含重复序列的pET20b-C1-Xyn-C1转化子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘亮伟	河南农业大学生命科学学院	36	241	9.0	14.0
5	贺添艳	河南农业大学生命科学学院	4	11	2.0	3.0
6	徐文选	河南农业大学生命科学学院	4	11	2.0	3.0
7	刘猛	河南农业大学生命科学学院	7	25	4.0	5.0
8	刘亚娟	河南农业大学生命科学学院	5	20	3.0	4.0