构建重组质粒的二步PCR方法

• 作者: 刘亚娟 刘亮伟 刘猛 韩来闯 马闪闪
• 来源期刊: 河南科学
• 关键词: 重组质粒 构建 PCR
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 化学与生命科学
• 页码范围: 1321-1325
• 页数: 5页
• 分类号: Q556
• 语种: 中文

摘要

建立一种简单的重组质粒构建方法——二步PCR，不需要限制性内切酶对基因和载体进行酶切。第一步常规PCR中，用正向引物（IF）和反向杂合引物（IR）扩增黑曲霉木聚糖酶Xyn基因，IF与基因特异性匹配，IR引物3’端与基因序列匹配、5’端含有19 bp pET20b一端正链序列；第二步反向PCR中，以扩增的Xyn基因作为正向引物，其3’端含有19 bp与环状pET20b模板退火、并在高保真Q5 DNA聚合酶作用下延伸，与模板另一端互补的反向引物VR协同作用，重组质粒通过PCR扩增出来。反向PCR产物经T4 DNA连接酶环化，并经DpnI限制性内切酶消解处理，可以直接转化BL21（DE3）感受态细胞。用这种方法将622、639、1125、1209 bp大小的基因重组pET20b中，显示出有较广泛的普适性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘亮伟	河南农业大学生命科学学院	36	241	9.0	14.0
5	马闪闪	河南农业大学生命科学学院	3	14	2.0	3.0
6	刘猛	河南农业大学生命科学学院	7	25	4.0	5.0
7	刘亚娟	河南农业大学生命科学学院	5	20	3.0	4.0
8	韩来闯	河南农业大学生命科学学院	2	14	2.0	2.0