三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR与ELISA检测弓形虫的比较

• 作者: 岳良平 林旋 温福利 王寿昆 王琨 赵东岳 黄翠琴
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 三重 RH株弓形虫 溶解曲线 重组质粒
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 476-481
• 页数: 6页
• 分类号: R382
• 字数: 3816字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.05.011

摘要

目的 选取弓形虫基因组中高度保守的多拷贝基因529 bp重复序列、ITS-1序列和B1基因作为real-timePCR检测的靶基因,建立检测弓形虫的三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法并且与ELISA检测方法进行比较.方法 将529 bp重复序列、B1基因、ITS-1序列的选定扩增序列进行克隆、测序构建标准品;将构建的3个标准品放在一个体系中进行扩增,进行三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR.结果 529 bp、ITS-1和B1的标准曲线的相关系数(R2)均为0.998,并且扩增效率均为96.724%,扩增片段的Tm值分别为 86.5±0.5 ℃ 、78.8±0.5 ℃、83.1±0.5 ℃;构建的三重SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR特异性试验表明,529 bp、ITS-1和B1有特异性的溶解曲线峰值分别是86.2 ℃、78.9 ℃和83.3 ℃,阴性对照无扩增曲线;敏感性试验表明,529 bp、ITS-1和B1序列最低检出限分别为 173copies/μL、123copies/μL、和135 copies/μL;Tm值的批内、批间重复试验的变异系数均小于0.13%;ELISA检测猪弓形虫IgG抗体的阳性率41.72%,ELISA与荧光定量PCR检测核酸阳性符合率为53.44%(P＜0.01).结论 建立弓形虫三重SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测技术具有高特异性和敏感性,可为临床弓形虫的诊断提供科学依据

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林旋		31	506	10.0	22.0
2	王寿昆	福建农林大学动物科学学院福建省动物药物工程实验室	70	693	15.0	23.0
3	黄翠琴	龙岩学院生命科学学院	23	112	6.0	10.0
4	温福利	福建农林大学动物科学学院福建省动物药物工程实验室	3	14	2.0	3.0
5	岳良平	福建农林大学动物科学学院福建省动物药物工程实验室	2	14	2.0	2.0
6	赵东岳	福建农林大学动物科学学院福建省动物药物工程实验室	2	14	2.0	2.0
7	王琨	福建农林大学动物科学学院福建省动物药物工程实验室	5	15	2.0	3.0