猪弓形虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 王东方 班付国 袁淑萍 谢彩华 闫若潜
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 弓形虫病 实时荧光定量PCR 猪 诊断
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 106-110
• 页数: 5页
• 分类号: S858.28
• 字数: 3956字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.05.020

摘要

为建立一种快速、敏感、特异的猪弓形虫检测方法,根据弓形虫保守基因序列,设计一套特异性引物和FAM荧光素标记的MGB探针;通过对PCR反应体系和反应条件进行优化筛选,建立了猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法,并对此PCR检测方法进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对60份疑似弓形虫感染的临床样品进行了检测.结果显示:建立的猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法在101～107拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系;对弓形虫重组阳性质粒出现阳性扩增信号,但对阴性对照的水和其他7种病原对照未扩增出特异性曲线;最低检测模板浓度为10拷贝/μL;自60份疑似猪弓形虫感染样品中检出32份阳性,并且和克隆测序结果一致.结果表明,本研究建立的猪弓形虫实时荧光定量PCR检测方法可用于猪弓形虫的快速检测,从而为猪弓形虫病的诊断提供了特异、敏感、高通量的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闫若潜		94	467	12.0	17.0
2	谢彩华		24	81	6.0	9.0
3	王东方		14	51	5.0	6.0
4	袁淑萍		2	0	0.0	0.0
5	班付国		32	20	3.0	3.0