沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用

• 作者: 但现龙 刘斌 史贤明 周敏 李小玲 王大鹏
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 医学
• 关键词: 沙门氏菌 聚合酶链式反应(PCR) 扩增内标 检测试剂盒
• 年，卷（期）: 2011,（16）
• 所属期刊栏目: 贮藏·保鲜·加工
• 页码范围: 3395-3402
• 分类号: TS207.4|R155
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.16.012

摘要

[目的] 研制一种能有效指示假阴性的PCR检测产品,用于沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测.[方法] 针对沙门氏菌invA基因、stn基因序列分别设计引物与扩增内标,建立添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,组装试剂盒,并对试剂盒的各项性能进行评价.[结果] 试剂盒对147株沙门氏菌和28株非沙门氏菌的检测结果显示,所有沙门氏菌均能扩增出362 bp的目标条带,非沙门氏菌仅扩增出520 bp的内标条带.试剂盒检测沙门氏菌基因组DNA的检测限为8.0 fg/PCR,检测染菌量为4-5 CFU/10 mL的牛奶样品,增菌8-10 h即得到阳性结果.反复冻融60次或-20℃下贮存1年,均不影响试剂盒的使用效果.对食品样品的检测结果显示,阳性检出率为2/30,与国标法的检测结果相符,比未添加扩增内标的PCR检测结果(阳性检出率为1/30)准确.[结论] 采用添加扩增内标的PCR试剂盒检测沙门氏菌,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并能有效指示假阴性,提高检测的准确性,适用于食品中沙门氏菌的快速筛检.