pEGFP-C3-hNIS重组质粒的构建及其在人胃癌BGC-823细胞的表达

• 作者: 刘超 张秀梅 徐华 王翠瑶 肖建英 高月
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 胃肿瘤 人钠碘转运体 基因克隆 真核绿色荧光蛋白表达载体 转染
• 年，卷（期）: 2011,（52）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3,6
• 分类号: R735.2
• 字数: 3314字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2011.52.001

摘要

目的 构建人钠碘转运体( hNIS)基因真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并研究重组hNIS基因在人胃癌BGC-823细胞中的表达情况.方法 采用Trizol一步法从甲状腺手术患者的甲状腺组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到T载体上,测序后亚克隆到真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3的多克隆位点,获得重组真核表达载体pEGFP-C3-hNIS.分别将pEGFP-C3-hNIS重组质粒(实验组)和pEGFP-C3(对照组)瞬时转染至人胃癌BGC-823细胞中,转染48 h后,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达情况,并通过Western blot方法检测hNIS基因的蛋白表达水平.结果 序列分析证实克隆片段与GenBank公布的hNIS基因序列(序列号:NM-000453)相似性达99.90％.转染48 h后,实验组与对照组细胞均可观察到较强绿色荧光信号,用hNIS基因特异性抗体检测表明实验组hNIS表达水平明显高于对照组.结论 成功构建hNIS真核绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C3-hNIS,并能在人胃癌BGC-823细胞中高表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘超		46	230	7.0	14.0
2	张秀梅		32	63	4.0	6.0
3	王翠瑶		26	60	5.0	5.0
4	肖建英		70	272	9.0	12.0
5	高月		15	41	4.0	5.0
6	徐华		3	6	2.0	2.0