人α-乳白蛋白质基因的克隆及其在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达

• 作者: 丰秀静 孟春花 张庆晓 曹少先 王慧利 王锋 田石 苏磊
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 人α-乳白蛋白质 基因克隆 奶山羊胎儿成纤维细胞 表达
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 581-585
• 分类号: S813.1
• 字数: 3461字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2012.03.024

摘要

采用PCR方法从人类基因组DNA中扩增hα-LA基因,将扩增产物克隆到pMD19-T载体,并进行测序验证.通过双酶切法将测序正确的hα-LA亚克隆至真核表达载体pCEP4,构建真核表达载体pCLA并进行酶切鉴定.用脂质体法将pCLA转染至奶山羊胎儿成纤维细胞中,用RT-PCR法检测细胞中hα-LA基因mRNA的表达,用Western-bloning法检测培养上清液中hα-LA蛋白质的表达.结果显示:克隆的hα-LA基因序列完全正确,pCLA酶切鉴定正确,RT-PCR检测到转染细胞中hα-LA基因mRNA的表达,Western-blotting检测到转染细胞培养上清液中hα-LA蛋白质.表明所克隆的hα-LA基因组DNA能够在奶山羊胎儿成纤维细胞中正确转录和翻译.