α-N-乙酰半乳糖胺酶的表达及活性检测

• 作者: 夏钢 林毅刚
• 来源期刊: 华东师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: α-N-乙酰半乳糖胺酶 重组蛋白 蛋白纯化 ELISA方法
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 67-74
• 页数: 8页
• 分类号: Q55
• 字数: 5367字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5641.2012.04.009

摘要

为了建立新型α-N-乙酰半乳糖胺酶的筛选、检测方法,实验中提取脑膜金黄杆菌的基因组DNA,以此为模板PCR扩增出α-N-乙酰半乳糖胺酶(A4).将A4克隆至pET-24a载体,转化B121表达菌株进行蛋白表达,使用亲和层析方法纯化His-A4酶,选择显色底物验证酶活性,同时,改进了传统的ELISA方法,直接将红细胞膜包被于ELISA检测平板中,以红细胞膜表面抗原作为直接底物,用ELISA方法检测酶活性.此研究建立了新型ELISA实验方法,以此方法验证了A4酶的活性,证明了此酶能够有效降低红细胞表面抗原抗体反应,且具有浓度和时间依赖性.