NR6A1过表达腺病毒载体构建及在血管平滑肌细胞中的表达

• 作者: 张亚辉 张志峰 张鹏 杨汉东 郎明健 钱航 闵新文
• 来源期刊: 湖北医药学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: NR6A1 In-Fusion克隆 平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 分子生物学
• 页码范围: 181-185,封2
• 分类号: Q782
• 字数: 4233字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建核受体家族分子NR6A1重组腺病毒载体,观察NR6A1蛋白在血管平滑肌细胞中的表达.方法:从cDNA文库中,利用PCR方法钓取目的基因NR6A1,采用In-Fusion克隆技术将目的基因插入腺病毒穿梭质粒pDC315 -3FLAG,将重组质粒与辅助包装质粒pBHG lox △E1,3 Cre共转染HEK293细胞,整合包装成重组腺病毒.运用蛋白免疫印迹技术检测NR6A1蛋白表达水平；运用免疫荧光化学技术检测NR6A1蛋白在平滑肌细胞中的亚细胞定位.结果:通过In-Fusion技术获得pDC-NR6A1-3 FLAG阳性质粒,该质粒在HEK293细胞中重组成腺病毒Ad-NR6A1；蛋白免疫印迹技术发现pDC-NR6A1-3FLAG重组质粒及Ad-NR6A1均能够正确表达NR6A1蛋白；而且该蛋白定位于培养的血管平滑肌细胞核中.结论:In-Fusion技术能够高效克隆NR6A1基因,所构建的NR6A1过表达腺病毒能够正确表达NR6A1核蛋白,NR6A1定位于血管平滑肌细胞核中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	闵新文	湖北医药学院心脏病中心	31	175	6.0	12.0
2	郎明健	湖北医药学院心脏病中心	15	56	5.0	7.0
3	钱航	湖北医药学院心脏病中心	11	20	3.0	4.0
4	杨汉东	湖北医药学院心脏病中心	13	57	4.0	7.0
5	张亚辉	湖北医药学院心脏病中心	7	17	3.0	4.0
9	张志峰	湖北医药学院生理学教研室	1	5	1.0	1.0