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罗氏沼虾诺达病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用
罗氏沼虾诺达病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用
作者:
卢小花
廖永志
江林源
童桂香
韦信贤
黎小正
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
罗氏沼虾诺达病毒
白尾病
衣壳蛋白基因
套式RT-PCR
快速检测
摘要:
罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)是世界动物卫生组织规定必需上报的罗氏沼虾白尾病(whitetail disease,WTD)的主要病原体。为建立快速检测MrNV的套式RT-PCR方法,根据GenBank上发表的MrNV衣壳蛋白基因序列设计2对特异性引物,对PCR条件进行优化后通过特异性试验和敏感性试验检测其特异性和敏感性。结果表明:该方法能特异性地扩增出205 bp的MrNV衣壳蛋白基因片段,最佳引物浓度为0.8μmol/L、退火温度为56℃、Mg2+浓度为2.0 mmol/L,而对其他对虾病毒基因组均没有扩增出条带;检测MrNV的灵敏度大约为RT-PCR的103倍,最低可检测到2.612×10-2 fg MrNV RNA。应用套式RT-PCR和一步法RT-PCR同时对108份来自广西各地的罗氏沼虾临床样品进行检测,其中套式RT-PCR共有9份检出MrNV,而一步法RT-PCR仅有3份检出MrNV。由此可见,建立的套式RT-PCR检测方法具有极高的特异性和敏感性,能提高MrNV的阳性检出率,可用于MrNV急性感染和隐性感染的早期诊断,为WTD的临床检测、流行病学调查、进出口检疫和实验室研究提供可靠的技术手段。研究亮点:根据GenBank上发表的MrNV衣壳蛋白基因序列设计2对特异性引物,优化建立了检测MrNV的套式RT-PCR方法。该方法具有极高的特异性和敏感性,最低可检测到2.612×10-2fg MrNV RNA,能提高临床样品MrNV的阳性检出率,可用于MrNV急性感染和隐性感染的早期诊断。
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文献信息
篇名
罗氏沼虾诺达病毒套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用
来源期刊
上海海洋大学学报
学科
农学
关键词
罗氏沼虾诺达病毒
白尾病
衣壳蛋白基因
套式RT-PCR
快速检测
年,卷(期)
2012,(1)
所属期刊栏目
水生生物疾病与防治
研究方向
页码范围
54-59
页数
分类号
S945.4
字数
语种
中文
DOI
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江林源
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上海海洋大学学报
主办单位:
上海水产大学
出版周期:
双月刊
ISSN:
1004-7271
CN:
31-2024/S
开本:
大16开
出版地:
上海市军工路334号
邮发代号:
4-604
创刊时间:
1992
语种:
chi
出版文献量(篇)
2427
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5
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